Hvorfor er DNase og lysozym i lysestrinn brukt under proteinrensing?

Svar:

For å rense proteinfraksjonen …

Forklaring:

Hvis du renser et (ofte spesifikt) protein, må du bli kvitt så mye søppel som mulig, som kan være bundet til dem.

Det avhenger av en grad av hvilket protein du er ute etter, men generelt er det en god ide, spesielt i preparativ rensing, for å kvitte seg med så mange urenheter som mulig.

1:

Ettersom proteiner generelt er store, og følgelig vil dukke opp i de nedre båndene i din (ultracentrifugerte) fraksjon, vil du bli kvitt noen nukleinsyrer, spesielt hvis proteinet du er puryfying angår slike som Pol1, Omvendt transkriptase eller noe annet enzym som er involvert i Replikasjon / Transkripsjon / Oversettelse.

Du kan skille de nukleinsyrer som er tilstede i prøven, ved å bruke en DNAse: dette vil helt hydrolyse DNA i dets bestanddeler.

Tenk deg, det er forskjellige DNAse-er, alle forskjellige i deres mekanisme og spesifisitet for deres substrat. Avhengig av DNAse som brukes, kan den også vise endo- eller exo- nukleaseaktivitet …

Mer til punktet, RNase er mer hensiktsmessig, da RNA vanligvis er mer innenfor oppdrifts / fraksjonen av proteiner, og kan være bundet til proteinet.

2:

lysozym: Et enzym som har minst to funksjoner:

Det deglycosylerer enzymer: De fleste proteiner som bæres i blodet, er glykosylerte: de har noen sukkermolekyler festet til dem. Lysozym vil fjerne sukkerrester.

Det har også kapasitet til å bryte ned celleveggen til Gram-Positive bakterier, noe som forårsaker dem lyse. (hvis du vil rense protein fra gram-positive bakterier)

Eventuelle degraderte produkter, enten nukleinsyre eller sukkerrester, kommer til syne på toppfraksjonene av sentrifugerøret på grunn av deres "lettere" oppdrift.