Hvorfor bruker vi en negativ kontroll i PCR?

Hvorfor bruker vi en negativ kontroll i PCR?
Anonim

Svar:

Se nedenfor

Forklaring:

PCR virker ut av et mal DNA. La oss si at du tester for HIV (HIV er et RNA-virus, men når det går inn i en celle, blir det forvandlet til DNA …. så det vil være HIV-DNA i en infisert celle). Primrene du bruker, vil lage et produkt (amplikon) som tilsvarer en del av HIV-DNA. Hvis du ser dette amplikonet, så har du HIV-sekvensen til stede ….. men hvis du ikke har en negativ kontroll, kan du ha forurensning.

PCR er ekstremt senstitiv. Det finnes mange løsninger som brukes i PCR (vann, buffer, dNTPs, enzym) … og alle kan lett bli forurenset med DNA fra andre prøver, eller til og med fra amplikonet som ble gjort i reaksjonen du gjorde i går. Så hvis du har Patient Xs DNA-prøve og du sjekker HIV ved PCR, kan PCR-primere lage et produkt av HIV-DNA i pasient Xs DNA-prøve (hvis den personen har HIV), eller det kan gjøre det av forurensning. Men du kan ikke fortelle om det er fra forurensning eller fra HIV i pasientens DNA.

Så du driver en vannkontroll. Tube 1 du plasserer alle komponentene i reaksjonen, og for DNA du bare legger til vann. Dette er den negative kontrollen. Ingenting burde forsterkes her. I Tube 2 legger du alle reaksjonskomponentene og Patient Xs DNA. Hvis du får et produkt her, (og ingenting i rør 1) har pasienten X antakelig hiv-DNA i hans / hennes DNA. Hvis du får et produkt i både Tube 1 og Tube 2, har du et forurensnings problem, og du kan ikke fortelle om HIV i pasientens prøve er fra sykdommen eller fra forurensning.

Så du kjører alltid en vannkontroll (vann i stedet for DNA).