Hva er western blotting?

Hva er western blotting?
Anonim

Svar:

Det er bruk av antistoffer for å oppdage proteiner som er blitt separert av SDS-PAGE og deretter overført til en membran.

Forklaring:

Celler inneholder en blanding av proteiner (mange tusen), og disse kan skilles av SDS-PAGE.

Proteinene fra SDS-PAGE overføres deretter ved bruk av et elektrisk felt fra gelen til en membran som vanligvis fremstilles nitrocellulose eller polyvinylidenfluorid (PVDF).

Membranen probes med et primært antistoff spesifikt for proteinet av interesse. Et sekundært antistoff blir så brukt til å detektere det primære antistoffet. Det sekundære antistoffet vil inneholde en markør som kan detekteres ved en kjemisk reaksjon for å enten gi et synlig bånd på membranen eller et signal som kan fanges av et spesialisert kamera.

Om nødvendig kan jeg utvide på dette svaret i god dybde, ettersom jeg har utført flere hundre Western blots i løpet av karrieren min.