Hvorfor holdes restriktjonsenzymer i 50% glyseroloppløsning?

Hvorfor holdes restriktjonsenzymer i 50% glyseroloppløsning?
Anonim

Svar:

For å holde dem intakt …

Forklaring:

Begrensning Enzymer brukes i svært små mengder, men kjøpes vanligvis i litt større batcher.

Hvis du ikke har noe annet, foretrekker du vanligvis å gjøre forskjellige tester med samme batch. Den kjøpte batchen må derfor lagres i lengre tid.

De fleste enzymer er helt glade i bufferen på 4degrees Celsius for en stund, men vil etter hvert nedbrytes. 24 timer er vanligvis den aksepterte grensen.

For lengre sikt må batchen fryses. -20C er standarden, og vil holde den i flere måneder. For enda lengre perioder (for eksempel ett eller flere år) er -70C normen.

Det er nødvendig å fryse det raskt, og i små beholdere (for eksempel Eppendorfs) for å unngå å tine / refreeere for ofte.

For å unngå skade på proteinet ved slike lave temperaturer, kan stabilisatorer bli tilsatt, slik som DTT (Di-Thio-Treitol), Serumalbumin og, viktigst, Glycerol (5-50%)

Merkelig nok, ved -20 ° C er det nødvendig å bruke 50% glycerol, mens ved -70 glycerol ikke er nødvendig, selv om tilsetning av det kan bidra til å stabilisere proteinet.