Svar:
Mange…
Forklaring:
Det er mange grunner til at band kanskje ikke vises på en western blot. Har prøven og antistoffkombinasjonene arbeidet tidligere?
Nedenfor er bare noen som jeg kan tenke på for øyeblikket som kan føre til at band ikke vises:
-
Gjorde proteinoverføringen fra gelen? Prøv å fargelegge membranen med noe som ponceau S eller amido svart for å se om bandet er til stede. Noen ganger kan du se proteinbåndene på membranen ved å vaske den og holde den i en vinkel mot lyset.
-
Fungerer det primære antistoffet? Dette er vanskelig å teste og den eneste måten du kan, er ved å inkludere en positiv kontroll der du vet at du har protein av interesse til stede. Hvis du har noen av proteinene av interesse, kan du prøve å spotte det på den vestlige blottemembranen (det vil si at du ikke kjører gelen) og se om du får et resultat hvis du behandler membranen som om det var en western blotting.
-
Er det sekundære antistoffet gjenkjenne det primære antistoffet? Igjen, en tøff å teste. Om den eneste testen du kan gjøre er spotprøven nevnt ovenfor i 2.
-
Fungerer "gjenkjenningssystemet"? Avhengig av deteksjonsmetoden du bruker, kan du prøve å spike i noen av det sekundære antistoffet for å se om deteksjonsløsningen, og også utløsningsmidlet / enzymet på det sekundære antistoffet, virker. Det vil si, kan du utløse reaksjonen bare med det sekundære antistoffet?
Til slutt kan det være så enkelt som en av løsningene som ble brukt under undersøkelsen av at tomten ble gjort feil. For eksempel, hvis saltkonsentrasjonen er feil i bufferen, kan dette føre til at antistoffene frigjøres fra blottet. Det samme ville også skje hvis bufferenes pH var feil.
Den "rareste" årsaken til at en western blotte ikke virker som jeg personlig har opplevd var da vi endret leverandøren av melkepulveret som vi pleide å blokkere membranen. Pulveret fra den nye leverandøren inneholdt en fosfotyrosinfosfatase som fjernet alle fosfatgruppene vi forsøkte å oppdage med vårt anti-fosfotyrosinantistoff.
Været (vises / vises) for å være hyggelig i dag. Som er riktig, vises eller vises?
"Vises" ville være det riktige svaret. "Vises" bruker den riktige formen av verbet (som skal vises) for emnet "vær".
Hva skjer hvis en A-person får B-blod? Hva skjer hvis en AB-type person får B-blod? Hva skjer hvis en B-type person mottar O-blod? Hva skjer hvis en B-type person mottar AB blod?
For å starte med typene og hva de kan akseptere: Et blod kan akseptere A eller O blod Ikke B eller AB blod. B blod kan akseptere B eller O blod Ikke A eller AB blod. AB blod er en universell blodtype som betyr at den kan akseptere enhver type blod, det er en universell mottaker. Det finnes O-type blod som kan brukes med hvilken som helst blodtype, men den er litt vanskeligere enn AB-typen, da den kan bli gitt bedre enn mottatt. Hvis blodtyper som ikke kan blandes, blandes av en eller annen grunn, vil blodcellene av hver type klumpe sammen inne i blodkarene, slik at blodet i blodet ikke er i orden. Dette kan også
Hvor mange ord med fire bokstaver er det mulig å bruke de første 5 bokstavene i alfabetet hvis første bokstaven ikke kan være en og tilstøtende bokstaver, kan ikke være like?
De fem første bokstavene er A, B, C, D, E Betrakt denne boksen. Hver 1,2,3,4 plasser representerer sted for et brev. Første plass 1 kan fylles på 4 måter. (Unntatt A) Første plass 2 kan fylles på 4 måter. Første plass 1 kan fylles på 3 måter. Første plass 1 kan fylles på 2 måter. Første plass 1 kan fylles på 1 måter. Totalt antall måter = 4 * 4 * 3 * 2 * 1 = 96 måter Derfor kan 96 bokstaver bli laget.