Hva er kromatografi-ionbytte? + Eksempel

Hva er kromatografi-ionbytte? + Eksempel
Anonim

Svar:

Det er en prosess for å separere forskjellige proteiner basert på deres ladnings- og bindingsegenskaper til et materiale.

Forklaring:

Ved forskjellige pH-verdier bærer forskjellige proteiner forskjellige kostnader. Ved å plassere en blanding av proteiner ved en innstilt pH kan du få en blanding som inneholder proteiner med forskjellige ladningsegenskaper.

Hvis denne blandingen av proteiner helles på en kolonne som inneholder et materiale med en ladning på den, vil kolonnen binde proteiner i motsatt ladning.

Du kan da bruke forskjellige løsninger som inneholder forskjellige mengder ioner for å eluere (unstick) proteiner fra kolonnen.

For eksempel, si at du hadde en blanding av proteiner som du ønsker å rense et bestemt protein. Hvis du visste at ved en bestemt pH var proteinet av interesse positivt ladet, kunne du hente blandingen på en kolonne som inneholdt negativt ladet materiale.

Alle proteiner som ikke bære en kostnad, eller når negativt ladet ville strømme rett gjennom kolonnen. Du kan deretter frigjøre ditt positivt ladede protein ved å oversvømme kolonnen med positive ioner som ville fullføre den negative belastningen på kolonnen. Denne konkurransen vil da føre til at proteinet av interesse blir eluert.

Her er et eksempel på dette.

Hver brett inneholder en buffer med en annen konsentrasjon, og som det kan ses i 175 mM prøven (øverste venstre hjørne) har svært lite rødt / brunt protein bundet til den ladede membranen da det har vært konkurranse mellom ioner i bufferen og protein for de ladede bindingsstedene på membranen (ioner i bufferen har "vunnet" fordi det er flere av dem og så de har forhindret proteinet i å bindes). I prøven nederst til høyre har mye protein bundet til membranen fordi det er færre ioner til stede for å konkurrere om bindingssteder.

I denne videoen kan du se anionbytterkromatografi i drift: