Svar:
Den vestlige blottet (proteinimmunoblot) er en mye brukt analytisk teknikk som brukes til å detektere spesifikke proteiner i en prøve av vevshomogenat eller ekstrakt.
Forklaring:
Nøkkelelementene som kreves for å oppnå denne oppgaven er:
- separering av proteinblandinger etter størrelse ved anvendelse av gelelektroforese.
- Den effektive overføringen av separerte proteiner til en fast bærer.
- Den spesifikke deteksjon av et målprotein av omtrent matchede antistoffer.
Evnen til western blots å tydelig vise tilstedeværelsen av et spesifikt protein, både etter størrelse og gjennom binding av et antistoff gjør dem godt egnet til å evaluere nivåer av proteinekspresjon i celler for å overvåke fraksjoner under proteinrensing.
I mange tilfeller brukes western blots i kombinasjon med andre viktige antistoffbaserte deteksjonsteknikker, som for eksempel ELISA eller immunohistokjemi.
Hva er en western blot HIV-test?
Den enzymbundne immunosorbentanalysen (ELISA), også kjent som et enzymimmunoassay (EIA). Serien av blodskjermbilder utføres for å teste for HIV. Den enzymbundne immunosorbentanalysen (ELISA), også kjent som et enzymimmunoassay (EIA), er den første testen som helsepersonell vil bestille å skjerme for hiv. ELISA, som Western blot-testen, oppdager HIV-antistoffer i blodet ditt.
Hva kan være problemet hvis bandene ikke vises i Western Blot?
Mange ... Det er mange grunner til at band kanskje ikke vises på en western blot. Har prøven og antistoffkombinasjonene arbeidet tidligere? Nedenfor er bare noen som jeg kan tenke på i øyeblikket som kan føre til at band ikke vises: Gjorde proteinoverføringen fra gelen? Prøv å fargelegge membranen med noe som ponceau S eller amido svart for å se om bandet er til stede. Noen ganger kan du se proteinbåndene på membranen ved å vaske den og holde den i en vinkel mot lyset. Fungerer det primære antistoffet? Dette er vanskelig å teste og den eneste måten
Hvorfor GAPDH brukes i Western Blot? + Eksempel
GAPDH brukes ofte som lastekontroll. I Western blotting bruker vi ofte GAPDH som lastekontroll. Hva dette betyr er at ved å undersøke GAPDH, kan vi kontrollere at vi har en lastet tilsvarende mengder proteiner på forskjellige baner i blottet. Et eksempel på bruk - si at vi har en sykdom som vi tror fører til en forhøyning av et bestemt protein i cellen. Vi ville lage en prøve fra "sunne" celler og en annen prøve fra "syke" celler. Vi ville da laste ekvivalente protein mengder av begge prøver på en gel for Western blot. Etter å ha undersøkt blot