Hva gjør primære antistoffer og sekundære antistoffer i ELISA-testen?

Hva gjør primære antistoffer og sekundære antistoffer i ELISA-testen?
Anonim

Svar:

Det avhenger av typen ELISA-analyse.

Forklaring:

ELISA = Enzymkoblet immunosorbentanalyse.

Det finnes forskjellige typer ELISA-analyser. Det du trenger er:

  • antistoff med et enzym festet til det
  • antigen som antistoffet binder til
  • substrat av enzymet som forårsaker en målbar reaksjon

De enzymet Festet til antistoffet er ofte HRP (pepperrotperoksidase). HRP kan reagere med forskjellige substrater som enten endrer farge eller avgir lys, både målbare.

Bildet viser en oversikt over forskjellige typer av ELISA analyser. Jeg vil forklare hvordan de fungerer nedenfor.

Direkte ELISA

En plate er belagt med antigenet (Ag) og a primært antistoff med enzym er tilsatt. Når substratet tilsettes, vil reaksjonen oppstå og er proporsjonal med mengden av antistoff-antigen-interaksjoner.

Indirekte ELISA

Igjen er en plate belagt med antigenet og a primært antistoff binder til antigenet. EN sekundært antistoff er tilsatt som binder til det første antistoffet. Det andre antistoffet inneholder enzymet som reagerer med substratet.

Sandwich ELISA

Her er to eller tre antistoffer involvert. Et oppfangningsantikropp er festet til platene og binder til antigenet. Dette følges av de samme trinnene som enten direkte (eneste antistoff) eller indirekte metode (to antistoffer).

Konkurransedyktig ELISA

Noen ganger kalt inhibering ELISA, er litt mer komplisert. En plate er belagt med antigenet som skal undersøkes. EN primært antistoff med enzym blir først inkubert med en prøve med en ukjent konsentrasjon av det samme antigenet. Dette legges deretter til platen, slik at antistoffene som fremdeles er fri til å reagere med antigenet på platen. Etter at antistoff-antigenkompleksene i prøven er vasket av, blir substratet tilsatt.

Når den ukjente prøven har mye antigen, vil det være mindre antistofffritt å binde seg til plate = lavere signal.